г.Екатеринбург Свердловский областной государственный противотуберкулезный диспансер в условиях детского санатория «Луч»

Отчет по договору № 25 от 15.01.03 на испытание аппаратов «Фтизио-Биофон»

В соответствии с планом работы по договору № 25 от 15.01.03 на испытание аппарата «Биофон» в условиях детского санатория «Луч» проведено обследование 48 туб/инфицированных детей. В исследование включено 25 человек основной и 23 человека контрольной групп. Из них 45 % детей мужского пола и 55 % детей женского. Возрастной состав обследуемых детей был в пределах от 10 до 14 лет. У 60 % детей в анамнезе имелся непосредственный контакт с больными туберкулезом. Все дети по данным туберкулинодиагностики были инфицированы микобактериями туберкулеза. Инфицированность высокого уровня регистрировалась у 18,5 % детей, а у 11 % обследуемых отмечалась инфицированность на гиперергическом уровне. Дети получали химиопрофилактическое лечение. Детям основной группы два раза в день после приема противотуберкулезных препаратов в 9 и 13 часов проводилось индивидуальное облучение аппаратом «Фтизио-Биофон» по принятой схеме.

В течение всего периода наблюдения за детьми с учетом разработанной по кратности и объему программы проводился лабораторный и клинико-рентгенологический контроль с заполнением контрольной карты на каждого ребенка. Рентгенологическое обследование проводилось на аппаратуре ТУР Д — 800 «Сименс» и состояло из обзорной рентгенограммы легких, а при необходимости — прицельной рентгенографии и томографии отделов легких. Из методов лабораторной диагностики использованы гематологические, иммунологические, биохимические и микробиологические методы исследования.

Из гематологических показателей анализировались: — количество лейкоцитов унифицированным методом подсчета в камере Горяева; — скорость оседания эритроцитов (СОЭ) унифицированным микрометодом Панченкова; — гемоглобин унифицированным гемиглобинцианидным методом; — лейкограмма с окраской по Романовскому — Гимзе.

Функциональное состояние иммунной системы определяет развитие туберкулезного процесса и эффективность проводимой химиопрофилактики. Различные проявления дисбаланса иммуннокомпетентных клеток вплоть до развития иммунодефицита оцениваются как неблагоприятные прогностические факторы. В связи с этим у всех детей определялся иммунологический статус до начала лечения с последующим контролем 1 раз в 10 дней в период наблюдения. Иммунограмма оценивалась по следующим показателям: — относительное и абсолютное количество Т — лимфоцитов и их субпопуляций методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана по методу Gondal M. et al., в модификации Лебедева К.А. и Понякиной И.Д.; — относительное и абсолютное количество В-лимфоцитов методом розеткообразования с эритроцитами мыши в модификации Лебедева К.А. и Понякиной И.Д.; — фагоцитарная активность нейтрофилов в НСТ-тесте и методом инкубации с латексом; — циркулирующие иммунные комплексы в сыворотке крови методом преципитации с 3,5% раствором полиэтиленгликоля с последующей колориметрией на спектрофотометре по методике Haskova V. et al, в модификации Гриневич Ю.А. и Алферова А.Н.; — определение титра противотуберкулезных антител в сыворотке крови по методу Миддлбрук-Дюбо реакцией пассивной гемаглютинации с использованием диагностикума Ленинградского НИИ вакцин и сывороток.

Клинический статус обследуемых детей оценивался по наличию симптомов интоксикации. Данные проявления этих симптомов по группам представлены в таблице 1.

Таблица 1. Проявление симптомов интоксикации у детей до начала лечения по группам.

Симптомы 1 гр. (основн.) 2 гр. (контр.)
Абс/ч. % Абс/ч. %
Отставание в физическом развитии 6 31,5 3 37,5
Бледность кожи 11 54,8 5 62,5
Периорбитальный цианоз 16 84,2 6 87,5
Снижение аппетита 5 26,3 2 20
Повышение утомляемости 14 73,6 6 87,5
Субфебрилитет 6 31,5 3 37,5
Ночная потливость 4 21,1 3 37,5
Снижение тургора кожи 10 52,6 5 62,5
Головные боли 12 63,1 4 50
Лимфаденопатия 17 89,4 6 87,5
Отсутствие симптомов 2 10,5 1 12,5

Динамика клинического статуса оценивалась и по гематологическим показателям: количеству лейкоцитов и лимфоцитов, а так же по СОЭ. Количество лейкоцитов в крови от 4,0 до 7,0 *109/л расценивалось как нормальное; от 7,0 до 9,0?*109/л — как умеренное повышение; более 9,0*109/л — как значительное повышение. Содержание лимфоцитов в периферической крови от 27 до 30 % считалось нормальным. Снижение до 22% расценивалась как умеренная лимфопения, а при содержании менее 22% — как значительная лимфопения. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) от 10 до 12 мм/час считалась нормальной, до 25 мм/час расценивалась как умеренно ускоренная, более 25 мм/час относилась к выраженному повышению.

По степени выраженности симптомов интоксикации детей основной и контрольной групп условно разделили на две группы. К первой группе отнесены дети, имевшие удовлетворительное общее состояние. Вторую группу составили дети, имевшие выраженные симптомы интоксикации: — жалобы на недомогание и повышенную утомляемость, при осмотре — отставание в физическом развитии, снижение тургора кожи, параорбитальный цианоз, повышенная влажность кожи, лимфоаденопатия, периодический субфебрилитет, а из лабораторных показателей — СОЭ свыше 12 мм\час и лейкоцитоз свыше 6,0*109/л.

Динамика симптомов интоксикации у детей отражена в таблице 2.

Таблица 2. Динамика симптомов интоксикации (в процентах).

Наличие симптомов интоксикации 1 гр. (основная) 2 гр. (контрольная)
До лечения После До лечения После
Лимфаденопатия 89,4 47,3 87,5 76,5
Слабовыраженные 59,7 9,7 68,3 10,5
Выраженные 32,5 6,5 27,5 10,2

Слабо выраженные симптомы интоксикации до начала лечения отмечались у 59,7% детей основной группы, после терапии количество таких детей снизилось до 9,7%.

За время терапии удельный вес детей с выраженными симптомами интоксикации в основной группе уменьшился в пять раз и составил 6,5% к концу лечения. В контрольной группе количество таких детей сократилось в 2,6 раза и составило 10,2.

Применение сочетания лечения аппаратом «Биофон» и химиопрофилактики у тубинфицированных детей оказало более выраженное терапевтическое действие при шейно-подчелюстных лимфаденопатиях в 35% случаев.

Таблица 3. Иммунологические показатели у тубинфицированных детей.

№п/п Показатели Гр.1 (конт) Гр.2(опыт)
1 % к-во т-лимфоцитов 57,1±2,9 55,7±1,3
2 Абсолютное к-во т-лимфоцитов 1,64±3,1 1,75±2,8
3 % к-во в-лимфоцитов 4,4±1,1 4,8±1,8
4 Абсолютное к-во в-лимфоцитов 0,29±0,02 0,31±0,03
5 % к-во теофиллин резистентных 42,4±2,1 44,1±1,8
6 % к-во теофиллин чувствительных 17,9±0,9 18,1±1,2
7 НСТ-тест (фал) 5,95±1,28 6,32±1,72
8 Ф.И (фагоцитоз латекса) 85,04±2,93 90,02±1,02
9 Циркулирующие иммунные комплексы 75,09±2,08 81,01±1,93

Важным клинико-диагностическим параметром является наличие специфических антител у тубинфицированных детей. Титр этих антител определяется степенью активации иммунной системы. Среди обследованных детей высокий титр регистрировался у 21 % детей, у 15,8 % — средний титр, а у 31,6 % детей титр был менее 1:2 и у такого же количества детей был получен отрицательный результат. Динамики в процессе терапии отмечено не было.

У всех детей проведено микробиологическое исследование микрофлоры верхних отделов дыхательных путей до начала лечения с последующим контролем в период наблюдения 1 раз в 10 дней. Сбор материала для исследования на неспецифическую микрофлору проводили стерильными тампонами, посев осуществляли количественным методом.

Известно, что в состав микрофлоры верхних дыхательных путей (в частности носоглотки) входят в качестве постоянных (облигатных) представителей непатогенные микроорганизмы, такие как негемолитические стрептококки, непатогенные стафилококки (Staph. saprophyticus, Staph. epidermidis), нейссерии. Факультативная, т.е. непостоянная микрофлора, может быть представлена патогенными и условно-патогенными микроорганизмами. К микроорганизмам, наиболее часто вызывающим воспалительные заболевания верхних дыхательных путей относятся: ?- гемолитические стрептококки, золотистый стафилококк, пневмококк, гемофильная палочка.

В процессе лечения «Биофоном» в течение 2,5 месяцев состав патогенной и условно-патогенной микрофлоры верхних дыхательных путей у обследованных детей претерпел изменения.

  1. Пневмококк, выделяемый до лечения и через месяц от начала лечения в 14,3% после 2,5 месяцев облучения «Биофоном» не выделялся.
  2. В 1,5 раза в опытной группе снизился процент выделения ?- гемолитического стрептококка (с 42,9% до начала применения лечения, а через 2,5 месяца облучения аппаратом до 28,6% случаев). В контрольной группе детей, не получавших лечения «Биофоном», ?- гемолитический стрептококк выделялся в 28,6% как в начале наблюдения, так и в конце.

Результаты, полученные при обследовании туб инфицированных детей, представлены в таблице 4.

Таблица 4.Видовой состав микроооганизмов, выделенных у детей

Вид выделенных культур Количество выделенных культур (в % от числа проб)
До лечения После лечения Контроль
1 мес. 2,5 мес
Staphylococcus aureus 6,7 0 14,3 28,6
Haemophylus influenzae 0 14,3 14,3 14,3
Streptococcus pneumoniae 6,7 14,3 0 14,3
Streptococcus ?-haemolyticus 42,9 0 28,6 28,6
Moraxella cattarhalis 0 0 14,3 42,9
Streptococcus ?-haemolyticus 71,4 71,4 28,6 42,9
Staphylococcus saprophyticus 57,1 28,6 14,3 0
Neisseria spp. 42,9 42,9 0 14,3

Через 1 и 2,5 месяца наблюдения в 14,3% проб у детей, получавших лечение «Биофоном», выделена гемофильная палочка, что совпадает с аналогичным показателем в контрольной группе.

Также через 2,5 месяца обнаружены золотистый стафилококк и Moraxella cattarhalis у детей, ранее не выделявших эти микроорганизмы. Возможно, это связано с поступлением в санаторий детей- носителей данных возбудителей. Однако нужно отметить, что уровень выделения этих микроорганизмов у детей, получавших лечение «Биофоном», был ниже, чем в контрольной группе. Staphylococcus aureus выделен в 14,3 проб у детей леченых «Биофоном» и в 28,6% проб — в контроле; Moraxella cattarhalis — в 14,3% и 42,9% проб соответственно. Также можно отметить некоторую тенденцию к снижению количества выделяемых непатогенных микроорганизмов, как у леченых детей, так и у не получавших лечения.

Важно отметить, что обследование детей проводилось на фоне эпидемического подъема заболеваемости ОРВИ и гриппом, что могло негативно отразиться на состоянии неспецифической микрофлоры верхних дыхательных путей. Дети контрольной группы в этот период все перенесли ОРВИ, в основной группе переболело 15% детей, однако они переносили заболевание в легких формах.

Таким образом, отмечается тенденция к снижению степени вирулентности микрофлоры, выделяемой из верхних дыхательных путей туб инфицированных детей при лечении «Биофоном». Для повышения достоверности полученных данных требуется проведение дополнительных исследований.

У детей групп риска с повышенной туберкулиновой чувствительностью и находящихся в контакте с туберкулезной инфекцией после проведенного курса профилактического лечения в соответствии с приказом № 109 туберкулинодиагностика должна проводиться только при снятии с диспансерного учета, т.е. через 12 месяцев после окончания химиопрофилактики. В связи с этим окончательный анализ полученных результатов по эффективности химиопрофилактического лечения возможен в феврале 2004 года.

После проведенного курса химиопрофилактического лечения дети обеих групп состоят на диспансерном учете по месту жительства. Дальнейшее наблюдения проводит участковый фтизиатр. По вопросу снятия с диспансерного учета дети этих групп будут вновь обследоваться в условиях диспансерного отделения СО НПО «Фтизиопульмонология». При этом проводятся туберкулинодиагностика и определение титра противотуберкулезных антител в процессе динамического наблюдения. При необходимости будет проведено дополнительное обследование.

В период проводимого лечения с применением аппаратов «Фтизио-Биофон» дети группы наблюдения не предъявляли жалоб на ухудшение самочувствия, связанные с проведением процедур облучения. Не выявлены отклонения в гематологических и иммунологических показателях групп сравнения.

По окончании проведенного лечения были выполнены опыты in vitro. Использованы полученные приборы «Фтизио-Биофон». В серии опытов использованы 2 прибора. Взвесь микобактерий готовили по стандарту мутности ГКИ 10 единиц в различных разведениях и засевали в количестве 0,1 мл на поверхность питательной среды «Новая» трех опытных (с облучением) и трех контрольных (без облучения) пробирок. Облучение проводили по разработанной схеме. Учитывали скорость роста колоний в часах и выход микробной массы путем смыва колоний с поверхности питательной среды с последующим определением оптической плотности на КФК-3 при длине волны 580 нм и длине кюветы 5 мм. При проведении фотоколориметрирования величина оптической плотности равная 0,288 ед. соответствовала 10 стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича и в количественном выражении была равна 109 микробных тел в 1 мл. Выполнено 80 исследований. Результаты представлены на графике. По оси Х сроки роста лабораторного штамма МБТ в часах, а по оси Y- массивность роста МБТ.

Туберкулостатическое действие облучения.

Отмечается угнетение ростовых свойств лабораторных штаммов МБТ под воздействием излучения аппарата «Фтизио-Биофон».

Ответственные исполнители:

  • Зав.бак.отделом ЦОЛ НПИ, к.м.н. Зуева М.Н.
  • Зав.диспансерным отд., к.м.н. Попкова Г.Г.
  • Зав. КДЛ ЦОЛ НПИ Хохлова Е.Ю.
  • Зав.бак.лабораторией ГПТД Корелина Е.А.

Исследование действия аппарата «Фтизио-Биофон» в сочетании с противотуберкулезными препаратами в опытах in vitro.

С помощью метода вертикальной диффузии было изучено сочетанное влияние основных противотуберкулезных препаратов и аппарата «Фтизио-Биофон» на ростовые свойства микобактерий туберкулеза. Использовались: — изониазид, стрептомицин, рифампицин, канамицин, этамбутол, пиразинамид. Действие этих препаратов на МБТ строго специфично и они занимают основное место в терапии туберкулеза.

При этом взвесь микобактерий лабораторного тест-штамма H37Rv с нагрузкой микробной массы 10 ед. х 10-1 засевалась в пробирки с питательными средами со стандартными рабочими разведениями препаратов: — стрептомицин 50 мкг/мл; рифампицин 50 мкг/мл; изониазид — 1 мкг/мл; канамицин 50 мкг/мл; этамбутол 5 мкг/мл; пиразинамид 50 мкг/мл. Облучение проводили по схеме. Антибактериальный эффект определяли по величине зон задержки роста МБТ, выраженной в мм. Выполнено 108 исследований. Данные представлены в таблице.

Туберкулостатическая активность препаратов в сочетании с «Фтизио-Биофоном».

Наименование препарата (доза мкг\мл) Зоны задержки роста МБТ в мм (опыт) Зоны задержки роста МБТ в мм (контроль) Изменение зон задержки роста МБТ в %
Изониазид (1 мкг\мл) 39,0 11,3 32,3 0,5 Увеличение На 20,7%
Стрептомицин (50 мкг\мл) 23,0 3,3 19,0 0,7 Увеличение На 21,1%
Рифампицин (50 мкг\мл) 16,7 0,9 16,0 1,3 Увеличение На 4,4%
Канамицин (50 мкг\мл) 19,0 2,0 17,3 0,9 Увеличение На 9,8%
Этамбутол (5 мкг\мл) 16,0 0,7 13,3 1,6 Увеличение На 20,3%
Пиразинамид (50 мкг\мл) 13,6 1,0 14,0 1,6 Обратное влияние

Зоны задержки роста при применении ЭМИ увеличились: — для изониазида на 20,7%; — для стрептомицина на 21,1%; — для рифампицина на 4,4%; — для канамицина на 9,8%; — для этамбутола на 20,3%.

Таким образом, специфическая антибактериальная активность основных противотуберкулезных препаратов в сочетании с воздействием аппарата «Фтизио-Биофон» в отношении МБТ повысилась.

Зав. отделом ЦОЛ НПИ СО НПО «Фтизиопульмонология» Хохлова Е. Ю. Г. Екатеринбург.

Оставьте комментарий